本文標題："如何對煙草寄主的冰凍葉片混合過程中攪動抽出原液"

發(fā)布者：YIYI ------ 分類: 站內(nèi)動態(tài) ------ 人瀏覽過 -----時間：2015-6-13 11:34:3

如何對煙草寄主的冰凍葉片混合過程中攪動抽出原液

   這個方法是在室溫下進行的。把系統(tǒng)感染的煙草寄主的冰凍葉片
在含有1%2-疏基乙醉的p17.2的0.5MNaz HPO, -KH,, PO;緩沖液中勻漿
化5分鐘。1克煙葉勻漿化在1毫升的緩沖液中，用紗布擠出勻漿，向每
100毫升抽出液中加8毫升n一丁醇。在這混合過程中攪動抽出液。葉綠
體凝結(jié)后，再攪動抽出液15分鐘，并在10,000克下離心30分鐘。向每100
毫升上層液體與攪動的同時加4克聚乙二醉(分子量6000)，并在10,000克
下離心15分鐘。
   團丸按每100毫升原始抽出液20毫升緩沖液的比例重新浮懸在pH7.2的
O.OIM磷酸緩沖液中。后在10,000克下離心15分鐘使其澄清。上層液體
將成為較純的病毒浮懸液。
   用聚乙二醉進行第二次沉淀可以獲得進一步的提純。每10奄升病毒浮
懸液加。4克NaCi和0.4克聚乙醉，邊加邊攪，在NaC1和聚乙二醉溶解之
后，在10,000克下離心15分鐘。按每100毫升原始抽出液2毫升緩沖液的
比例，把團丸重新浮懸在0.01M磷酸緩沖液中，在10,000克下離心5分鐘。
  上層液體將是TMV溶液，并表現(xiàn)為奶白色。每100克葉片大約可得到100
毫克TMV。

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